留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码
x

肢芽间充质干细胞条件性FKBP38基因敲除小鼠模型的构建

胡乐 李禹杨 柯志勇 张月 张武锔

胡乐, 李禹杨, 柯志勇, 张月, 张武锔. 肢芽间充质干细胞条件性FKBP38基因敲除小鼠模型的构建[J]. 分子影像学杂志, 2019, 42(1): 67-69. doi: 10.12122/j.issn.1674-4500.2019.01.16
引用本文: 胡乐, 李禹杨, 柯志勇, 张月, 张武锔. 肢芽间充质干细胞条件性FKBP38基因敲除小鼠模型的构建[J]. 分子影像学杂志, 2019, 42(1): 67-69. doi: 10.12122/j.issn.1674-4500.2019.01.16
Le HU, Yuyang LI, Zhiyong KE, Yue ZHANG, Wuju ZHANG. A preliminary study of conditional limb bud mesenchymal stem cell FKBP38 knockout mice[J]. Journal of Molecular Imaging, 2019, 42(1): 67-69. doi: 10.12122/j.issn.1674-4500.2019.01.16
Citation: Le HU, Yuyang LI, Zhiyong KE, Yue ZHANG, Wuju ZHANG. A preliminary study of conditional limb bud mesenchymal stem cell FKBP38 knockout mice[J]. Journal of Molecular Imaging, 2019, 42(1): 67-69. doi: 10.12122/j.issn.1674-4500.2019.01.16

肢芽间充质干细胞条件性FKBP38基因敲除小鼠模型的构建

doi: 10.12122/j.issn.1674-4500.2019.01.16
基金项目: 国家自然科学基金青年基金(31600964)
详细信息
    作者简介:

    胡 乐,助理实验师,E-mail: hule0422@qq.com;李禹杨,学生,E-mail: 739570287@qq.com。胡乐与李禹杨共同为第一作者

    通讯作者:

    张月,副研究员,E-mail: yugi0530@hotmail.com

    张武锔,在读研究生,E-mail: smuzhangwj@qq.com。张武锔与张月共同为通信作者

A preliminary study of conditional limb bud mesenchymal stem cell FKBP38 knockout mice

  • 摘要: 目的 构建并鉴定条件性肢芽间充质干细胞FKBP38基因敲除小鼠,为研究FKBP38基因在骨发育及骨关节炎中的作用机制提供动物模型。 方法 将Prrx1-Cre小鼠与FKBP38flox/flox交配繁殖出F1代小鼠,得到基因型为Prrx1-Cre(Fkbp38flox/+)小鼠;选基因型Prrx1-Cre(Fkbp38flox/+)的小鼠与FKBP38flox/flox小鼠杂交获得F2代小鼠;基因型为Prrx1-Cre(Fkbp38flox/flox)的小鼠即为本实验所需要构建模型小鼠。3周龄鉴定小鼠基因型,4周龄时用Western blot验证FKBP38基因敲除效果。 结果 F2代小鼠中包含基因敲除鼠,PCR结果显示基因型为Cre/FKBP38flox/flox,Western blot结果显示FKBP38基因敲除效果明显。 结论 基于Cre/loxp重组酶系统,繁殖出肢芽间充质干细胞FKBP38基因敲除鼠,为在动物水平上探究FKBP38在骨发育及骨关节炎的作用机制提供模型基础。

     

  • 图  1  Prrx1-Cre基因鉴定结果图

    样品1, 2, 3为单一亮带, 为表达Cre重组酶阳性小鼠; 4, 5, 6无条带, 为cre重组酶阴性小鼠; 样品M为Marker.

    图  2  FKBP38基因鉴定结果图

    样品1, 2, 3为FKBP38纯合子小鼠(FKBP38flox/flox), 可见272 bp单一亮带; 样品4, 5为野生型b6小鼠, 可见单一217 bp亮带, 样品M为Marker.

    图  3  Prrx1-Cre(Fkbp38flox/flox)基因型鉴定结果图

    样品2, 6, 7为FKBP38 纯合子表达Cre重组酶阳性小鼠(FKBP38flox/flox; Cre); 样品1为Fkbp38杂合子表达Cre重组酶阳性小鼠(FKBP38flox/-; Cre); 样品4为FKBP38杂合子表达Cre重组酶阴性小鼠(FKBP38+/-); 样品3, 5为FKBP38纯合子表达Cre重组酶阴性小鼠(FKBP38f/f).

    图  4  Western blot验证FKBP38基因敲除效果

    表  1  基因鉴定引物

    Gene Primer (5′→3′) Length of product (bp)
    Prx1 F: TCCAATTTACTGACCGTACACCAA
    R: CCTGATCCTGGCAATTCGGCTA
    500
    FKBP38 F: TCATGCAGGCAGAGTGCACATAG
    R: CTGGAACTGGAGACTGGCTCCA
    MT: 272WT: 217
    下载: 导出CSV
  • [1] Glyn-Jones S, Palmer AJ, Agricola R, et al. Osteoarthritis[J]. Lancet, 2015, 386(91): 376-87
    [2] Hwang HS, Kim HA. Chondrocyte apoptosis in the pathogenesis of osteoarthritis[J]. Int J Mol Sci, 2015, 16(11): 26035-54
    [3] Aigner T, Kim HA. Apoptosis and cellular vitality - Issues in osteoarthritic cartilage degeneration[J]. Arthritis Rheum, 2002, 46(8): 1986-96
    [4] Battistelli M, Salucci S, Olivotto E, et al. Cell death in human articular chondrocyte: a morpho-functional study in micromass model[J]. Apoptosis, 2014, 19(10): 1471-83
    [5] Feac C. From cell death to viral replication: the diverse functions of the membrane-associated FKBP38 Frank Edlich1 and Christian Lücke2[J]. Curr Opin Pharmacol, 2011, 11(3): 348-53
    [6] Kang CB, Hong Y, Dhe-Paganon S. et al: FKBP family proteins: immunophilins with versatile biological function[J]. Neurosignals, 2008, 16(4): 318-25
    [7] Bai XC, Ma DZ, Liu AL, et al. Rheb activates mTOR by antagonizing its endogenous inhibitor, FKBP38[J]. Science, 2007, 318(5852): 977-80
    [8] Wang JD, Tong WY, Zhang XN, et al. Hepatitis C virus non-structural protein NS5A interacts with FKBP38 and inhibits apoptosis in Huh7 hepatoma cells[J]. FEBS Lett, 2006, 580(18): 4392-400
    [9] Shirane M, Nakayama KI. Inherent calcineurin inhibitor FKBP38 targets Bcl-2 to mitochondria and inhibits apoptosis[J]. Nat Cell Biol, 2003, 5(1): 28-37
    [10] Shirane M, Ogawa M, Motoyama J, et al. Regulation of apoptosis and neurite extension by FKBP38 is required for neural tube formation in the mouse[J]. Genes to Cells, 2008, 13(6): 635-51
    [11] 王 帅, 赖姨梅, 林 艳. 等: FKBP38肝脏特异敲除小鼠模型的构建[J]. 现代生物医学进展, 2017, 17(26): 5001-6
    [12] Misaka T, Murakawa T, Nishida K, et al. FKBP8 protects the heart from hemodynamic stress by preventing the accumulation of misfolded proteins and endoplasmic reticulum-associated apoptosis in mice[J]. J Mol Cell Cardiol, 2018, 114(1): 93-104
    [13] 李 涛, 卢圣栋. 时空特异性基因打靶的应用及有关进展[J]. 生物工程进展, 2002, 37(2): 56-60
    [14] Frank EM, Erdmann J, Jarczowski JR, et al. Bcl-2 regulator FKBP38 is activated by Ca2þ/calmodulin[J]. Embo J, 2005, 24(7): 2688-99
    [15] Robert A. Saxton ADMS: mTOR signaling in growth, metabolism, and disease[J]. Cell, 2017, (168): 960-76
    [16] 许颖, 范凯健, 王婷玉. 骨关节炎的发病机制及其药物治疗进展[J]. 实用药物与临床, 2018, 42(12): 1424-9
    [17] 娄思权. 骨关节炎的病理与发病因素[J]. 中华骨科杂志, 1996, 15(1): 57-60
    [18] 邱贵兴. 骨关节炎诊治指南(2007年版)[J]. 中华关节外科杂志: 电子版, 2007, 1(4): 281-5
  • 加载中
图(4) / 表(1)
计量
  • 文章访问数:  2894
  • HTML全文浏览量:  1157
  • PDF下载量:  11
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2018-11-04
  • 刊出日期:  2019-01-01

目录

    /

    返回文章
    返回

    关于《分子影像学杂志》变更刊期通知

    各位专家、作者、读者:

    为了缩短出版时滞,促进科研成果的快速传播,我刊自2024年1月起,刊期由双月刊变更为月刊。本刊主要栏目有:基础研究、临床研究、技术方法、综述等。

    感谢各位专家、作者、读者长期以来对我刊的支持与厚爱!

    南方医科大学学报编辑部

    《分子影像学杂志》

    2023年12月27日